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DH5α感受态细胞
点击次数:197      发布时间:2019-01-08

产品简介

  大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞(Competent Cells)。在进行基因重组实验时,使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时,特别是在目的基因含量十分低的情况时,使用的感受态细胞十分重要。本公司生产的感受态细胞是采用大肠杆菌经特殊工艺处理得到的感受态细胞,长期以来备受广大客户的喜爱,可用于DNA的化学转化。使用pUC57质粒检测,转化效率可达107~108,在-70℃下保存几个月转化效率不发生改变。

 

使用方法

  1.将100μl感受态细胞于冰上解冻。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。

  2.取5μl连接产物加入到感受态细胞中,轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30min。

  3.将管放入预加温到42℃的水浴中,热激90秒。快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2~3min。该过程不要摇动离心管。

  4.每管中加900μl LB(SOC)培养基(不含抗生素),37℃振荡培养1h。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

  5.室温4,000rpm离心5min,弃去900μl上清后,用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含相应抗性的LB琼脂平板或含X-gal、IPTG、相应抗性的LB琼脂平板表面。注意:细胞用量应根据连接效率和感受态细胞的效率进行调整。

  6.将平板置于室温直至液体被吸收。

  7.倒置平皿,于37℃培养,12~16h后可出现菌落。

 

储存条件
  -70℃冻存

 

注意事项

  1.感受态应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。

  2.进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

  3.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到低。

 

上海淳麦生物科技有限公司终解释

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