技术文章首页 > 技术文章 > JM110 感受态细胞 产品说明书
JM110 感受态细胞 产品说明书
点击次数:175      发布时间:2019-04-01

产品规格

JM110:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存条件(保质期):                            -80℃(6个月) 

 

 

 

基因型

rpsL (StrRthr leu thi-1 lacgalgalara tontsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15] 

 

 

 

 

产品说明

JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR);是甲基化基因damdcm缺失的菌株,提取得到的质粒DNA,可被对damdcm甲基化敏感的内切酶切割;lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选,但转化效率不高,一般不用于质粒构建,只适用于质粒转化。JM110感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒检测转化效率约107 cfu/μg DNA。

 

操作方法

 

1. JM110感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。

4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

 

 

注意事项

1. 感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。

2. 混入质粒时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

 

QQ在线客服
电话咨询
  • 13770640776