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常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21的区别
点击次数:364      发布时间:2019-04-17

上海淳麦生物, 感受态细胞专家

1:DH5a菌株

DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1, hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

 

2:BL21(DE3) 菌株

该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)

 

3:BL21(DE3) pLysS菌株

该菌株含有质粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr

 

4:JM109菌株

该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时,由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株

基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]

 

5:TOP10菌株

该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC),φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG

 

6:HB101菌株

该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验

基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1, galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1

 

7:JM110或SCS110

大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影

响.

部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。

大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以XbaI为例,只有在位点序列旁出现GA或TC,该XbaI位才会被甲基化。

而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:

(1)选用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA识别切割位点与MboI相同;但不受甲基化影响;

(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备,如E.coli JM110和链霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的DNA就能被上述酶切割。

 

8:E.coli JM110

要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110

如果由JM110或SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别用途特征

 

Xl1-Blue菌株

基因型:endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIqΔ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。

特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。

用途:分子克隆和质粒提取。

 

BL21(DE3)菌株

基因型:F–ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-)λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。

特点:该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。

用途:蛋白质表达。

 

BL21(DE3)ply菌株

基因型:F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-)λ(DE3) pLysS(cmR)。

特点:该菌株带有pLysS,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能够降低目的基

因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。

用途:蛋白质表达

 

DH5α菌株

基因型:F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupGΦ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-,λ–

特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。

用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

 

JM109菌株

基因型:endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+Δ(lac-proAB) e14-

[F‘traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。

特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。

用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。

 

DH10β菌株

基因型:

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR

Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-

The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10β。

host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322

useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues,useful for plasmid rescue procedures。

ELECTROMAX DH10β T1 CELLS

说明:

DH10β细胞是高转化效率的E. coli,可以完美应用于大多数实验应用。

DH10β基因型具有以下特点:

lacZΔM15用于重组克隆的蓝/白斑筛选

消除了mcrA、mcrBC、mrr和hsdRMS限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2) endA1突变,可以增加质粒产量和数量

高效率转化大小为150 kb的质粒,用于产生cDNA或基因组文库

DH10β可以表达tonA的基因型,tonA能够提供对T1和T5噬菌体感染的抗性(DH10ΒT1R)。

DH10β的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galKλ ·rpsL (StrR) nupG

DH10β T1R的基因型:F·mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galKλ ·rpsL (StrR) nupG tonA

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