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不会操作Stbl3感受态细胞的看这里
点击次数:85      发布时间:2019-05-09
   Stbl3感受态细胞Stbl3菌株来源于 HB101 E. coli strain,是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。基因组含有重组酶recA13突变,可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
 
  Stbl3感受态细胞操作说明:
 
  1.CMbio Stbl3感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
 
  2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
 
  3.向离心管中加入0.9 mL 室温 S.O.C. 培养基,使用其他培养基会降低转化效率。30℃,225 rpm复苏90分钟。 (当质粒中含有不稳定片段时, 30℃培养可降低错误重组的概率,若转化control PUC19 计算转化效率,则需37℃, 225 rpm复苏60分钟。)
 
  4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 培养基上。
 
  5.将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化control PUC19 计算转化效率,则需37℃培养过夜)。
 
  Stbl3感受态细胞注意事项:
 
  CMbio 感受态细胞在冰上融化。
 
  混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
 
  转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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