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BL21(AI)感受态细胞
点击次数:326      发布时间:2019-06-23
货号:CM-6039G
供应商:上海淳麦
数量:1000只
英文名:Mach1-T1Chemically Competent Cell
保质期:1年
保存条件:零下80度
规格:20*100ul

BL21(AI) 感受态细胞基因型:

F- omphsdSB(rB-mB-gal dcm araB::T7RNAP-tetA

BL21(AI) 感受态细胞简要说明:

 High5TM系列BL21(AI) 感受态细胞是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r)BL21(AI) 来源于BL21菌株,为膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株。
该酶的缺失能够有效防止表达的异源目的蛋白在细菌体内的降解。
使用L-阿拉伯糖诱导araBAD启动子下游的蛋白表达。使用葡萄糖可以抑制araBAD启动子下游的蛋白表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株体内的T7 RNA聚合酶水平能够进行有效调节,BL21(AI) 感受态细胞能够有效表达对其他BL21细胞有毒或生长抑制的蛋白。从BL21(AI) 菌株中获得目的重组蛋白产量,和其他BL21菌株产量相当。 High5TM系列BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg

BL21(AI) 感受态细胞操作说明:

  1.  100μl冰上融化的BL21(AI)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激90秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。

  1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YTLB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。


4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含50 µg/ml四环素及所选质粒筛选抗生素的2YT LB培养基上。

  1.  将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意:

  1. Brian Caliendo (Voigt 实验室)报道过pCP20质粒比较难于转化到这个感受态细胞中,而pCP20转化到其他菌株中都很正常,但是菌体原因未知。

2. 即使不加葡萄糖,BL21(AI) 细胞的araBAD启动子下游的本底蛋白表达水平仍然很低,加入葡萄糖后能够进一步的降低本底蛋白的表达水平。

BL21(AI) 感受态细胞注意事项

  1.   感受态细胞在冰上融化。
  2.  混入质粒时应轻柔操作。
  3.  转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
  4.  诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。

5. 为获得需要量的蛋白,诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
 

建议选择该菌株进行蛋白表达的条件如下:

  1.  使用T7启动子载体(高拷贝或者低拷贝都可以)进行蛋白表达。
  2.  使用其他BL21进行蛋白表达时,观察到明显的细菌生长的抑制作用。

3. 表达一个已知的毒性蛋白。

上海淳麦生物科技有限公司  感受态细胞培养专家  4006815880

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