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什么是DH10B感受态细胞?怎么使用
点击次数:47      发布时间:2019-08-07
   什么是DH10B感受态细胞?感受态细胞就是用理化方法诱导细胞,使其处于zui适摄取和容纳外来DNA的生理状态。通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
 
  DH10B感受态细胞采用干冰运输,经过逐步的降温,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暂时停止其生命活动,保存其活性,使您的实验更生动。
 
  细菌怎么实现抗噬菌体的特点?
 
  (1)抑制吸附:改变细菌表面的受体蛋白结构,受体缺失,竞争性抑制产物的作用等;
 
  (2)阻止噬菌体DNA的注入;
 
  (3)降解或干扰噬菌体DNA;
 
  (4)流产感染。
 
  DH10B感受态细胞操作说明:
 
  CMbio DH10B感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目 的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
 
  42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
 
  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
 
  5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
 
  将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13h。
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