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关于DH10B感受态细胞的这些事情你该知道
点击次数:36      发布时间:2019-09-18
   DH10B感受态细胞操作说明:
 
  1.CMbio DH10B感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目 的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。
 
  2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
 
  3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
 
  4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
 
  5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13h。
 
  产品特点:
 
  1. 可高效转化大小为150Kb质粒,用于产生cDNA或基因组文库。
 
  2. 用于蓝、白斑筛选。
 
  DH10B感受态细胞培养基及培养冻存条件准备:
 
  1、准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
 
  2、培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
 
  3、冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
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