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人膀胱癌顺铂耐药细胞 BIU-87/DDP
更新时间:2019-09-13
产品型号:
描述:人膀胱癌顺铂耐药细胞 BIU-87/DDP上海淳麦生物科技有限公司是一家专注于研发和生产免疫细胞及干细胞相关产品的生物高科技企业,致力于打造国内原代细胞研发和服务平台,做“您身边的细胞培养专家“。产品涵盖免疫细胞及干细胞、细胞系、完全培养基、无血清培养基、基础培养基、血清、转染试剂、胰酶等细胞培养产品。

人膀胱癌顺铂耐药细胞 BIU-87/DDP的详细资料:

人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP生长条件:
 

培养条件   

 90%DMEM(高糖)+10%FBS+1%双抗

温度                   

             37℃

空气条件  

5% CO2,,95% AIR

传代方法

1:2传代,2~3天换液

冻存条件

90%FBS+10%DMSO


抗原表达:

血型A,RH+;HLA A1,A3,B12,B17,CW5

 

受体表达:

人肾上腺素能α2A、尿激酶受体(u-PAR)、维生素D(中度表达)、尿激酶受体(u-PAR);维生素D(中度表达)、人肾上腺素能α2A

Oncogene:

Myc+;ras+;Myb+;Fos +;SIS+;P53 +;ABL-;ROS -;SRC--

 

基因表达:

IgA的分泌成分;

癌胚抗原;转化生长因子β结合蛋白;粘蛋白,myc+;ras+;myb+;fos+;sis+;p53+;abl-;ros-;src-,血型A;Rh+;HLA1,A3,B1,B17,Cw5,HT-29细胞CD4阴性,但有gal细胞表面表达。ACTH神经酰胺(HIV可能的替代受体)。

 

蜂窝产品:

IgA分泌成分;carcinoembryonic antigen(CEA);转化生长因子-β结合蛋白;黏蛋白

肿瘤形成:

是的,在裸鼠体内;形成与结肠原发性(I级)一致的高分化腺癌;肿瘤也形成于激素治疗的仓鼠体内。

 

免疫学:

细胞角蛋白+,细胞角蛋白-7-,细胞角蛋白-8+,细胞角蛋白-17-,细胞角蛋白-18+,细胞角蛋白-19+,结蛋白-,内皮-,EpCAM+,GFAP-,HMB-45-,神经丝-,波形蛋白

 

产品相册产品图片:

操作流程

1、收到人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP后,请按照以下方法进行操作

取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

 

2、细胞传代:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,*后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存:

1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;

3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;

 

4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP发货方式:

复苏后发货:我们复苏细胞后发货,货期一周左右,免运费。(气温较好建议复苏后发货)

冻存发货(干冰运输):需额外增加干冰运费,选择干冰运输的我们发两管细胞,为了保证客户接种可靠性多发一管。(气温低于0℃须冻存发货)

细胞发货采取专业的运输包装,并选择*快捷的运输方式(顺丰速运或其他空运快递)

本公司细胞引种来源:ATCC、DSMZ、ECACC、武大细胞库、上海生化细胞所、中国科学院典型培养物保藏委员会等

 

细胞处理方法:

一、贴壁细胞

1、 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。

4、37度平衡1-2小时。

5、用移液管吸取培养基,到50ml离心管中,剩下细胞密度达到80%至90%可以传代,如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。

6、如果肉眼检查上清有细胞,对50ml上清进行离心收集细胞,如果细胞连片状态,弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化(1ml胰酶37度),接种培养。

 

二、悬浮细胞

1、接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张)。

2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。

3、严格遵循无菌操作规范,打开细胞培养瓶。

4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒)。

5、1000rpm,5min 离心,用吸管小心吸出上清,加入培养基,重悬细胞。

6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种,加入新鲜培养基,置于 37℃,5%CO2 培养(大部分细胞)。

 

培养操作:华拓细胞培养操作指南

细胞常见问题分析:细胞培养常见问题分析

 

细胞在发货前进行质检:

1、细胞存种的活性检测

2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检

3、衣原体、支原体检测(荧光法、培养法等)

 

产品质量保证及售后:

1、 细胞为三代以内,活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好,我们完全免费重新发货。

2、 实验过程中若确定是客户问题,客户仅需支付物流和耗材费用,我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。

3、 产品使用过程中,华拓生物可提供技术上的指导。

 
注意事项
人膀胱癌顺铂耐药株BIU-87/DDP
,烧瓶培养的处理程序

在培养瓶中接种细胞并在培养基中完全填充培养基以防止运输过程中细胞的丢失。

1、收到后,目视检查培养物是否有微生物污染的宏观证据。

使用倒置显微镜(配备有相位传感器),仔细检查是否有微生物污染的证据。还检查以确定大多数细胞是否仍然附着在烧瓶底部?在运输过程中,培养物有时被粗略地处理,并且许多细胞经常分离并悬浮在培养基中(但仍然是可行的)。

2、如果细胞仍然附着,无菌去除5至10毫升的运输介质。可以节省运输媒介以重复使用。在5%℃的空气中,在37℃下培养细胞,直到它们准备进行传代培养。

3.如果细胞没有附着,无菌地移除烧瓶的全部内容物,并以1000rpm离心5至10分钟。取出运输介质并保存。在10毫升这种培养基中重新沉淀颗粒细胞并加入25厘米的烧瓶中。在空气中5%℃下,在37℃下孵育,直至细胞准备进行传代培养。

 

二、传代程序

体积为75厘米的烧瓶。增加或减少其他尺寸培养容器所需的分离培养基的量。

1、去除和丢弃培养基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液冲洗细胞层,除去所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中,倒置显微镜下观察细胞到细胞层分散(取决于胰蛋白酶的批)。

注意:为了避免结块,不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞,等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6~8毫升的完整生长培养基,轻轻吸液,抽吸细胞。

5、在新培养容器中加入适当的细胞悬液等分试样。

6、培养37°C培养基。

推荐栽培比为1:3∶1:4。

介质更新:每周2至3次

 

三、冷冻保存程序

该协议使用量在75平方厘米的瓶;比例减少或增加的其他尺寸的分离介质的培养容器的数量。

1、去除和丢弃培养基。

2。简要冲洗细胞层0.25(w/v)trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕迹血清含有胰蛋白酶抑制剂。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中,倒置显微镜下观察细胞到细胞层是分散的(通常在1到10分钟)。

注意:为了避免结块,不要在击打或摇晃瓶子时搅拌细胞,等待细胞分离。难以分离的细胞可以放置在37°C以促进扩散。

4、加入6~8毫升的完整生长培养基,轻轻吸液,抽吸细胞。

5。去除胰酶EDTA溶液,将细胞悬液到离心管和旋转约5 1000rpmfor 10分钟。

6、低温保存培养液中的上清液和复苏细胞。

7、将细胞转移至低温瓶,1ml/瓶。

8、低温容器中的细胞Frozen(NalgENα5100-01)。

 如果你对人膀胱癌顺铂耐药细胞 BIU-87/DDP感兴趣,想了解更详细的产品信息,填写下表直接与厂家联系:

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